Chloé Lambert a été formée par Jean-Pierre Martino au conservatoire du Xe et par Slava Kokorin à Berlin. Elle commence au théâtre sous la direction de Benno Besson dans Le Roi cerf de Carlo Gozzi. Elle joue des auteurs classiques comme Musset, Marivaux, Wilde, Shakespeare, notamment La Nuit des rois mise en scène par Nicolas Briançon en 2010, Mon père avait raison de Sacha Guitry avec Claude Brasseur, mis en scène par Bernard Murat en 2008. Elle participe aussi à de nombreuses créations comme Marie Hasparren de Jean-Marie Besset au Théâtre 14, L’Ouest solitaire de Martin Mcdonagh en 2003 à Avignon repris au Théâtre du Rond-Point, Merlin de Tankred Dorst mis en scène par Jorge Lavelli à la MC 93 et aux Nuits de Fourvières, L’Amour, la Mort, les Fringues mis en scène par Danièle Thompson au Théâtre Marigny en 2011 et Le Lien d’Amanda Sthers au Théâtre des Mathurins en 2012. Elle reçoit le prix Suzanne Bianchetti pour L’Autre de Florian Zeller en 2005, dont elle jouera d’autres pièces comme Si tu mourais en 2006 à la Comédie des Champs-Élysée et Une heure de tranquillité au Théâtre Antoine en 2013. On a pu la voir à la télévision et au cinéma notamment dans le rôle de la mariée du long métrage Mariages avec Miou-Miou et Jean Dujardin de Valérie Guignabodet. En 2010, elle adapte et interprète la correspondance d’Anais Nin et d’Henry Miller avec Marc Barbé pour France Culture dans une réalisation de Cédric Aussir. En 2012, elle remporte le prix Sofithéa pour La Veillée au festival des mises en capsules du Ciné 13.
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